物理图谱制作
BAC物理图谱是全基因组从头测序、图位克隆和基因组比较研究等的重要工具。武汉八颗星团队人员有多年的BAC物理图谱制作和比较分析经验(Lin et al., 2012; Wang et al., 2013; Wang et al., 2014;Pan et al., 2014;Pan et al., 2016等)。
我们发明的新方法(发明专利:201310288791.8)与原有BAC物理图谱制作方法相比,具有如下特点:
- 高效、简便、经济。使得构建物理图谱的花费在可承受范围内;
- 分辨率高,不依赖酶切位点。原有方法依赖酶切位点,但酶切位点数量有限,且并非平均分布,同时受实验条件、反应体系、酶切片段长度估算和实验操作等诸多因素影响(如星活性或不完全酶切),并且一般每次只能获得由一种酶制作的物理图谱,由不同酶制作的物理图谱不能整合。而我们的方法利用的是任意序列,其结果可以整合;
- 可同时获得物理图谱和基因组草图,其上的序列可作为锚定点与其它任何方法产生的序列整合。这特别适合完善已用二代测序但组装困难的基因组。
- 序列先定位到了BAC克隆上,有利于杂合基因组的组装。
- 与光学物理图谱制作方法相比,我们的方法有如下特点:
- 光学物理图谱基于酶切位点,存在除上述第2点提到的问题外,如果直接用基因组DNA实验还有DNA甲基化等修饰引起的问题,而我们的物理图谱不依赖酶切位点;
- BAC物理图谱指导下的测序方法大大降低了基因组的复杂度,对复杂基因组测序,BAC物理图谱起着光学物理图谱无可比拟的作用;
- 我们的物理图谱能为定向测序、补缺或整合同一基因组其它来源的序列提供框架和DNA模板,最终帮助完成参考序列级的全基因组序列。
The workflow of Feature sets-based Genome Mapping (Pan et al. 2016)